단백질 함량을 측정하기 위해 브래드포드 방법, 즉 쿠마시 브릴리언트 블루 방법을 사용했습니다. 원리는 Coomassie Brilliant Blue가 이온화된 상태에서 갈색-적색으로 나타나며 최대 광흡수율은 488nm입니다. 단백질과 결합하면 파란색으로 변하며, 단백질은 색소와 결합하면 595nm 파장의 빛을 최대로 흡수합니다. 흡광도 값은 단백질 함량에 비례하며 단백질의 정량 측정에 사용할 수 있습니다.

단백질과 쿠마시 브릴리언트 블루는 약 2분 만에 평형에 도달하며 반응은 매우 빠르다. 접착제는 실온에서 1시간 동안 안정하게 유지됩니다. 이 방법으로 제조된 시약은 간단하고 조작이 쉬우며 반응 감도가 높습니다. 감도는 Lowry 방법보다 4배 더 높으며 마이크로그램 수준에서 단백질 함량을 확인할 수 있습니다. 주요 단점은 완충액 내 특정 단백질과 간섭 물질의 구조입니다.

추가 정보:

쿠마시 브릴리언트 블루 방법에 의한 단백질 함량 측정 과정:

1. 브래드포드 농축 염료 준비: 쿠마시 브릴리언트 블루 G-250 100mg을 추가합니다. 95% 에탄올 50ml에 녹이고 85% 인산 100ml를 넣은 후 증류수를 200ml에 가하면 염료용액은 4°C에서 최소 6개월간 안정하게 유지되어야 한다.

2. 표준 곡선 단백질 샘플 준비: 테스트할 샘플과 유사한 특성을 가진 단백질을 표준으로 사용하십시오. 예를 들어 항체를 측정할 때 정제된 항체를 표준으로 사용할 수 있습니다. 테스트할 샘플을 알 수 없는 경우 항체를 표준 단백질로 사용할 수도 있습니다. 일반적으로 표준 곡선은 20ug-150ug/100ul 사이에서 그려집니다.

3. 완충액에 시험할 시료를 녹인다. 완충액은 표준곡선을 만드는 데 사용한 완충액과 동일해야 한다. (PBS가 가장 적합하다.)

4. 농축된 염료결합액을 증류수와 1:4 비율로 희석합니다. 침전이 발생하면 걸러냅니다.

5. 각 샘플에 희석된 염료 결합 용액 5ml를 추가하고 5~30분 동안 그대로 둡니다. 염료가 단백질과 결합하면 빨간색에서 파란색으로 변하며, 595nm의 파장에서 흡광도를 측정합니다. 색상 반응은 30분을 초과해서는 안 됩니다.

6. 표준곡선을 바탕으로 테스트할 시료의 농도를 계산합니다.

참고: 이 방법은 대부분의 단백질 정량에 상대적으로 정확하지만, 저분자 기본 펩타이드의 정량에는 적합하지 않습니다. 리보뉴클레아제나 리소자임 같은 것 말이죠. 0.2%를 초과하는 세제 농도는 측정 결과에 영향을 미칩니다. TritonX-100, SDS, NP-40 등

바이두 백과사전-쿠마시 브릴리언트 블루 방식