형광 염색법

면역 형광 염색의 주요 원리는 항원과 항체 이성의 결합을 이용하여 목적단백질을 표시하는 것이다. 주로 단백질과 일항의 결합을 포함하고, 그 다음은 형광기단이 있는 이항일항의 식별과 결합이다. 형광현미경으로 형광을 관찰할 수 있다. 다음은 주로 세포 면역 형광 염색의 세 가지 실험 단계를 나열한 것이다.

1.zo- 1 의 면역 형광은 다음과 같습니다.

1. 세포가 커버에서 성장하여 95%- 100% 로 융합되면 배양함에서 꺼낸다.

2. 예열된 1×PBS 로 3 회 세탁 10 분마다.

포름 알데히드 3.4% 는 실온에서 20-30 분 동안 고정됩니다.

4. 1× PBS 로 3 회 세탁 10 분마다.

5.0.2% Triton X- 100 2-5 분.

6. 1× PBS 로 3 회 세탁 10 분마다.

7.5%BSA 는 실온에서 30 분 동안 밀봉했습니다.

8. 일항 (1%BSA 로 희석) 을 넣어 젖은 상자에 4 박 넣는다.

9. 1× PBS 로 3 회 세탁 10 분마다.

10. 30 분 동안 이항 (1%BSA 로 희석) 을 추가하여 불을 끕니다.

11..1× PBS 3 회 10 분마다.

12.95% 글리세롤 밀봉.

참고: 포름알데히드 4%, triton 0.2%, BSA 5% 는 모두 1×PBS 로 희석되었습니다.

둘째, 세포 등반 벽의 면역 형광 단계는 기본적으로 동일합니다.

1. 세포 슬라이드를 꺼내서 35mm 또는 60mm 에서 사용한 세포 배양 접시에 넣고 PBS 로 세 번 씻는다. 참고: 때로는 만든 세포 슬라이드가 비교적 작을 수 있으므로, 가져갈 때는 조심해야 하며, 이면에 주의해야 한다. 접시로 세탁하는 것이 비교적 편리하여, 왕복하는 것을 피한다. 또한 씻을 때 PBS 를 너무 많이 넣지 말고 세포를 씻지 마세요. 씻을 때 나는 항상 PBS 를 더 넣고, 조금만 흔들어 버리며, 5 분이나 10 분을 기다리지 않아도 된다.

2.4% 냉폴리포름알데히드로 20 분 고정해 PBS 로 세 번 세탁합니다.

3.0.2% triton x-10010 분 PBS 로 세 번 씻어요.

4. 제 2 항체 같은 숙주 혈청을 30 분 동안 폐쇄하고 PBS 로 세 번 세탁합니다.

5. 4 도 젖은 상자에서 밤을 지낸 후에도 37 도 아래서 2 시간을 보낼 수 있습니다. 전자효과가 좋은 것 같아요. PBS 세 번 씻어요.

6. 2 항항은 실온으로 2 시간 (빛을 피한다) 또는 37 도 65438 0.5 시간, PBS 로 세 번 씻어야 한다.

7. DAPI 로 핵을 염색한 다음 형광판을 직접 찍는 것이 좋다.

8. 증류수는 박막 주변의 PBS, 글리세린, 매니큐어를 씻어 낸다. 글리세린은 수지처럼 마르지 않기 때문에 매니큐어가 없으면 지저분할 수 있다.

권장 사항:

1. 염색 후 봉막 앞에서 직접 사진을 찍는 게 좋을 것 같아요. 가끔 봉막에 문제가 있을 수 있으니까 사진을 찍고 싶으면 없어져요. 또한 너무 오래 끌지 마라, 형광은 퇴색할 것이다.

형광막은 반드시 빛을 피해야 한다. 잘 키우면 시간이 지나도 좋은 영화를 찍을 수 있다.

3. 2 항용 전에 반드시 원심해야 한다. 그렇지 않으면 때때로 그런 침전물이 있을 수 있다. 즉, 조각에 큰 비특이적 형광점이 있어 보기 어렵다.

세포 면역 형광의 간단한 실험 단계는 다음과 같습니다.

1 .. 혈청 단백질 H7, 2-7, 4 37 도 PBS 시간을 씻어냅니다.

2. 메탄올로-20 C 로 20 분 고정한 후 자연 건조 10 분.

3.PBS 세탁: 3min×3.

4. 1% triton: 25 분 ~ 30 분, 50 ultriton+5 mlpBS.

5.PBS 세탁: 2×5 분.

양 혈청 밀봉: 37 도, 20 분.

7. 한 다스, 4 박, 보통 18 시간 이상 또는 37 도, 1-2 시간.

8.4 도 PBS 세탁, 3 분 ×5 회.

9. 두 번째 저항은 37 도 1 시간도 안 된다.

10.37 도 PBS 세탁 3×5 분.

1 1. 건식 밀봉 판 (밀봉 용액 PH8.5)

어떤 방법을 사용하든 PBS 버퍼액으로 씻을 때는 반드시 깨끗이 씻고 pH 값을 측정해야 한다. PBS 를 여러 번 사용하거나 PBS 청소 시간을 연장할 수 있습니다. 결과 배경이 높으면 헹굼 횟수와 시간을 연장할 수 있습니다.